用層析法，電泳法，免疫化學(xué)的方法對蛋白樣本進(jìn)行分離或分析前通常需要先進(jìn)行蛋白定量。用比色法進(jìn)行蛋白定量分析的試劑通常分為兩類：一類是間接檢測法，即檢測與蛋白螯合后被還原銅離子；另一類是直接檢測法，即使用與蛋白結(jié)合的染料，檢測樣品中顏色的變化。所有的檢測方法都要適用于應(yīng)用的適用性。每種檢測方法都有它的局限和優(yōu)勢，出于復(fù)雜的研發(fā)需要，以G-Biosciences公司為代表的生物科技公司開發(fā)出了多種蛋白定量試劑盒。這些試劑都是熟悉的、穩(wěn)定的方法，并且能夠提供一致可靠的結(jié)果，包括增強(qiáng)的染料結(jié)合蛋白定量，基于銅離子的蛋白定量，創(chuàng)新的測試條和點(diǎn)蛋白定量。總體而言，這些方法代表了目前的比色法檢測和總蛋白定量的技術(shù)水平。

四大金剛之-BCA蛋白定量

BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法, 也叫史密斯分析定量，和去污劑溶解的蛋白溶液都是兼容的。

BCA蛋白定量法基于2個(gè)反應(yīng)。首先，蛋白樣品中的肽鍵還原二價(jià)銅離子為一價(jià)銅離子，這是一個(gè)溫度依賴的反應(yīng)。被還原銅離子的量和溶液中的蛋白的量成正比。下一步，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，在0.02-2mg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計(jì)算待測蛋白的濃度。 

BCA蛋白定量分析適合在 1ml比色皿或微孔板的蛋白溶液定量。試劑盒可以提供傳統(tǒng)的BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)物或非動(dòng)物蛋白標(biāo)準(zhǔn)物。對于稀釋的低濃度的蛋白樣品（0.5-20µg/ml），筆者推薦使用微量BCA蛋白定量分析試劑盒。對于含有還原劑的樣品，推薦你使用BCA-還原劑兼容型蛋白定量分析試劑盒。

BCA的優(yōu)勢是：

l 靈敏度高的顯色檢測

l 蛋白濃度檢測范圍20-2,000µg/ml

l 與多數(shù)離子和非離子型去污劑兼容

l 方便的微孔板和1ml比色皿檢測形式

四大金剛之-CB-X蛋白定量

對于科研人員來說，從市場上大量的蛋白定量產(chǎn)品中選擇可以和自己的樣本兼容的試劑盒是一個(gè)難題。CB-X蛋白定量分析試劑盒解決了這個(gè)難題，因?yàn)樗统Ｒ?guī)使用的緩沖液以及蛋白分離，儲(chǔ)存盒檢測的條件都是兼容的。

對于簡單不復(fù)雜的水質(zhì)緩沖液蛋白樣本，CB-X是一個(gè)高度靈敏的，單個(gè)試劑的檢測，5分鐘可以完成實(shí)驗(yàn)。CB-X蛋白定量分析試劑盒使用一個(gè)改進(jìn)版的考馬斯亮藍(lán)染料。

對于復(fù)雜的蛋白樣本，CB-X蛋白定量分析試劑盒帶有能夠去除干擾準(zhǔn)確蛋白定量的試劑和化學(xué)品從而來回收樣本的必需試劑。這些干擾試劑包括去污劑，離液劑，還原劑，烷化劑，糖，高鹽濃度，緩沖液試劑，螯合劑。去雜回收步驟和隨后的蛋白定量分析實(shí)在同一個(gè)管中完成保證沒有蛋白的丟失和蛋白定量的準(zhǔn)確性。

如果這個(gè)蛋白樣本不包含干擾試劑可以直接進(jìn)行單個(gè)試劑定量分析同時(shí)可以得到一個(gè)線性反應(yīng)。如果干擾試劑存在或者產(chǎn)生人為的結(jié)果這時(shí)蛋白樣本可用去雜回收試劑進(jìn)行一步處理，然后進(jìn)行蛋白定量來產(chǎn)生線性的反應(yīng)。

CB-X蛋白定量分析試劑盒同時(shí)提供一個(gè)批次特定性的CB-X查詢表格，這可以讓科研人員進(jìn)行單個(gè)蛋白的回收，然后定量，之后在CB-X查詢表格上通過吸收值來得到蛋白的濃度。CB-X查詢表格消除了所需要的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，節(jié)省的大量的時(shí)間和精力。CB-X查詢表格是通過復(fù)雜的蛋白混合物制成，和來自于哺乳動(dòng)物，植物，細(xì)菌和酵母的蛋白數(shù)據(jù)可以很好的吻合。一套牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)物一起提供，當(dāng)科研人員單獨(dú)使用CB-X染料，或者他們傾向于得到自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線或得到在自己特定的試驗(yàn)下的CB-X查詢表格時(shí)，這套標(biāo)準(zhǔn)物用于產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。CB-X蛋白定量分析試劑盒在每個(gè)檢測0.5-50微克的時(shí)候是非?？煽康摹Ｔ噭┖邪銐虻?/span>CB-X檢測染料來進(jìn)行500次蛋白定量以及足夠的回收試劑用于250次回收。

CB-X檢測的優(yōu)勢：

l 0.5-50微克的線性反應(yīng)

l 迅速沉淀和顏色反應(yīng)

l 效期長，可以有12個(gè)月穩(wěn)定保存

l 高度的可靠性和重復(fù)性

四大金剛之-RED 660蛋白定量

去污劑和還原劑兼容的蛋白定量

RED 660蛋白定量檢測是基于一種試劑的顯色反應(yīng)，它的效果要優(yōu)于其他商業(yè)化的顯色反應(yīng)定量檢測，包括Bradford和增強(qiáng)的Coomassie/ Bradford定量檢測。RED 660蛋白定量檢測為您帶來更好的線性，更好的顏色穩(wěn)定性，以及和考馬斯法相比對于去污劑，還原劑和其他干擾試劑更好的兼容性。這種單個(gè)的即用的試劑可以為您迅速分析總蛋白濃度和產(chǎn)生高度可重復(fù)性的結(jié)果。

這種檢測適用于簡單和快速的蛋白定量，可以檢測蛋白濃度在50-2000μg/ml的濃度范圍內(nèi)。

這種檢測是基于單個(gè)染料金屬復(fù)合物試劑。蛋白和染料金屬復(fù)合物的結(jié)合是在酸性的條件下從而產(chǎn)生顏色的變化，從紅棕色變?yōu)榫G色，顏色密度的變化和蛋白濃度呈正比，顏色的變化是染料金屬復(fù)合物在低PH值下去質(zhì)子化的結(jié)果，這個(gè)過程通過和正電荷的氨基酸基團(tuán)反應(yīng)下完成的。蛋白定量可以使用少至0.5微克的蛋白，蛋白染料復(fù)合物可以在5分鐘內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，同時(shí)可以在幾天內(nèi)保持穩(wěn)定。

RED 660蛋白定量試劑盒提供500個(gè)標(biāo)準(zhǔn)檢測或者2500個(gè)標(biāo)準(zhǔn)微孔檢測。RED 660蛋白定量試劑盒和大部分去污劑兼容，它的兼容性可以被Neutralizer™進(jìn)一步增強(qiáng)。Neutralizer™是一種*的化學(xué)物質(zhì)，它能夠隔絕離子去污劑，包括SDS，使溶液和RED 660蛋白定量試劑兼容。Neutralizer™也可以和Laemmli上樣緩沖液一起使用。

對于蛋白定量的干擾

兼容于RED 660蛋白定量的試劑以及這些試劑在標(biāo)準(zhǔn)檢測種所接受的濃度被列了出來。在大部分情況下使用一個(gè)校準(zhǔn)的空白對照可以消除或減少由干擾試劑所導(dǎo)致的錯(cuò)誤。

*表明這種試劑和RED 660蛋白定量一起使用所接受的濃度是配套Neutralizer™一起使用。

RED 660蛋白定量優(yōu)勢：

l 迅速，單個(gè)試劑檢測

l 兼容性好，和一系列去污劑和還原劑兼容

l 線性好，和其他蛋白定量方法相比有更好的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線

四大金剛之-Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定量

保證蛋白定量不受干擾試劑的影響。

一種高度靈敏的，顯色法的蛋白定量方法，這種檢測克服了常規(guī)實(shí)驗(yàn)室試劑存在于蛋白溶液中對蛋白定量的干擾，同時(shí)顯示出最小的蛋白和蛋白之間的檢測波動(dòng)性。

這種定量方法不受常規(guī)實(shí)驗(yàn)試劑存在的影響，比如還原劑，螯合試劑，去污劑，氨試劑，糖，離液劑，鹽類，藥物，抗體，鈷和其他常規(guī)實(shí)驗(yàn)室試劑。NI蛋白定量法由兩步組成。

通用蛋白沉淀試劑(UPPA™)加到蛋白溶液中來迅速沉淀總蛋白。蛋白通過離心得到固定以及干擾試劑在上清液中從而被丟棄。

蛋白濃度得到定量通過和堿性銅離子溶液進(jìn)行混合，銅離子結(jié)合到肽的主鏈上，定量檢測未結(jié)合的銅離子。檢測和蛋白的側(cè)鏈無關(guān)從而使蛋白之間的波動(dòng)性可以最小化。顏色深度和蛋白的量成反比。

Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定量優(yōu)勢：

l 線性反應(yīng)0.5μg-50μg蛋白

l 少量樣本即可，只需1-50μl

l 不受非蛋白化學(xué)品和試劑的影響

l 實(shí)驗(yàn)時(shí)間，大約30分鐘

l 產(chǎn)品效期長，可以存放一年

常用的蛋白定量產(chǎn)品的選擇：

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