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核酸純化試劑的使用方法和注意事項

更新時間:2022-09-08

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   核酸純化試劑是我們實驗室常用的實驗,常說的核酸純化是指分離核酸物質(zhì)DNA/RNA和蛋白質(zhì)、多酚、多糖等其他高分子物質(zhì),那么,下面一起了解下核酸純化試劑使用方法和注意事項吧!
  01、保持核酸分子一級結(jié)構(gòu)的完整性
  02、盡量排除其他分子的污染,保證核酸樣品的純度
  細胞分裂
  1、物理作用:低滲透分解、超聲波分解、凍融分解、研磨、勻漿等。 用玻璃珠、超聲波、研磨等方法破碎細胞;
  2、化學(xué)作用: CTAB法、SDS處理等;
  烷基三甲基溴銨是陰離子清除劑,溶解細胞膜,與核酸形成復(fù)合體。 該復(fù)合體可溶于高鹽溶液,可用有機溶劑提取,去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后,加入乙醇沉淀,從而分離核酸。
  堿分解法是質(zhì)粒DNA的常用提取方法。 染色體DNA遠大于質(zhì)粒DNA分子,染色體DNA為線狀分子,而質(zhì)粒DNA為共價鍵環(huán)狀分子。 用堿處理DNA溶液時,線狀染色體DNA容易變性。 共價鍵環(huán)狀質(zhì)粒DNA恢復(fù)中性PH后恢復(fù)天然構(gòu)象,變性染色體DNA的片段與變性蛋白質(zhì)和細胞片段結(jié)合沉淀,成為具有復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA
  3、酶作用:加入溶菌酶和蛋白酶等
  在純化具有細胞壁的微生物樣本時,加入溶菌酶等溶解細胞壁,進行以下分離和純化。 蛋白酶k是從白色中分離出來的強力蛋白溶解酶,用于清除核酸酶和其他蛋白污染。
  分離和純化
  1、加入濃鹽溶液:鹽濃度不同的溶液中,DNA、RNA的溶解度不同
  2、加入SDS :將核酸從蛋白質(zhì)上游分離出來
  3、萃?。菏杷缘鞍自谟袡C相中,核酸殘留在上層水相中
  4、硅膠吸附:硅膠膜吸附核酸
  5、磁珠吸附:利用磁珠選擇性吸附核酸
  分離方法的優(yōu)缺點:
  1、RNA回收效率高、耗時長、不利于自動化,也不利于基因組DNA污染
  2、鹽析法:產(chǎn)量低,不適合自動提取
  3、硅膠吸附法:純度高、簡單方便、無毒性、可自動化
  4、磁珠吸附法:產(chǎn)量高、純度好,可以實驗特異種的核酸分離,可以自動化
  5、加熱煮沸法:只用于純化DNA,成本低、純度低、產(chǎn)量低
  清洗和溶解
  清洗:進一步除去雜質(zhì),通常使用75%乙醇
  溶解:一般使用無核酸酶水或TE緩沖液
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