二甲基亞砜是一種重要的滲透型細(xì)胞保護(hù)劑。在深低溫(零下200度)保存細(xì)胞時(shí)凍存過程中，為防止細(xì)胞內(nèi)液冰晶形成、滲透壓改變、細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂等導(dǎo)致的損傷，有必要使用含有DMSO冷凍保護(hù)劑。DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞中，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過程，同時(shí)提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細(xì)胞損傷。華雅思創(chuàng)代理二甲基亞砜及相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)耗材BD凍存管等，更多干細(xì)胞耗材盡在【干細(xì)胞搜網(wǎng)】-www.stemcell.so

上海華雅思創(chuàng)生物公司主要在中國代理銷售BD、Bio-Rad、GE、NUNC、Nalgene、PALL（頗爾公司）、Axygen、GEB等品牌的實(shí)驗(yàn)耗材類產(chǎn)品 ；在中國代理銷售BD、GE、StemRD、Roche、R&D、Bio-Rad、LONZA、Cygnus、ExCell、ALPCO、Amresco等生物試劑類產(chǎn)品；在中國代理銷售Bio-Rad、BRAND、 HEROS等生物儀器類產(chǎn)品。

深低溫時(shí)二甲基亞砜的細(xì)胞毒性受到抑制。復(fù)蘇時(shí)動(dòng)作要快，盡快洗掉二甲基亞砜，否則會(huì)造成對細(xì)胞嚴(yán)重的毒性。二甲基亞砜(DMSO)是目前的細(xì)胞凍存保護(hù)劑，但也是一種以細(xì)胞毒性很大的化學(xué)試驗(yàn)劑。研究結(jié)果表明，培養(yǎng)液中DMSO濃度為10%時(shí)，細(xì)胞生長抑制率近100%;1‰濃度時(shí)抑制率為35%，即使是0.04‰的濃度，DMSO對細(xì)胞的生長也有不利的影響。

華雅思創(chuàng)提示：培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)為防止以下問題，細(xì)胞將做冷凍保存:*、株化細(xì)胞產(chǎn)生性狀轉(zhuǎn)變(transformation)。第二、污染。第三、株化細(xì)胞之增殖或生理特性有特定之限制，只能在一定的代數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行增殖培養(yǎng)或進(jìn)行特定實(shí)驗(yàn)。目前可能解決這些困難的方法其中之一是細(xì)胞冷凍保存法，將冷凍細(xì)胞儲(chǔ)于冷凍管中，將其中一部分拿出來做一些必要的檢查，其它的冷凍細(xì)胞則在需要時(shí)拿出來解凍，用來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本方法亦可節(jié)省繼代培養(yǎng)時(shí)所花費(fèi)的勞力、物力，并可防止培養(yǎng)中經(jīng)常發(fā)生意外事故，喪失細(xì)胞珠。因此冷凍保存法為細(xì)胞培養(yǎng)研究上之基本技術(shù)之一。

華雅思創(chuàng)[說明] :

1.經(jīng)過冷凍保存后的細(xì)胞，其生存率會(huì)下降，冷凍時(shí)之冷卻速度，保存溫度，解凍時(shí)升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。

2. 一般而言，4℃以下慢慢地冷凍，保存于液態(tài)氮中(-196℃)。

3. 37℃快速解凍。

4.保護(hù)劑(抗凍劑)：添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。

5.有些細(xì)胞如果采用上述的方法時(shí)，無法得到高的存活率。此時(shí)，則必需考慮可能傷害細(xì)胞的機(jī)制，添加劑之作用等而來找出適當(dāng)?shù)臈l件來修正。

華雅思創(chuàng)[材料] :

1.增殖期之細(xì)胞 (9成滿)，培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中數(shù)個(gè)。

2.冷凍用培養(yǎng)基(2倍) : 培養(yǎng)基內(nèi)加入三倍血清及15% DMSO，保存在冰箱中。

3. 冷凍管、保利龍制容器、鋁制ample支持棒。

華雅思創(chuàng)[步驟]:

1.準(zhǔn)備2 x 107cells/ml的細(xì)胞懸浮液。

2.冷凍用培養(yǎng)基(2倍) :以微溫水溶解DMSO，在培養(yǎng)基中混合為15% (v/v)。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前在行配制，配好后放在冰箱中，使用量必須和細(xì)胞懸浮液的量相等;使用時(shí)維持在4℃。

3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml (1/2冷凍管體積)冷凍用培養(yǎng)基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的細(xì)胞懸浮液;等量混合。將蓋子扭緊后，在管中部貼上膠帶密封。

4.記載卷標(biāo) : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫明細(xì)胞名稱、代數(shù)、冷凍的年，月，日等所需要的項(xiàng)目。

5.放進(jìn)冷卻的保利龍容器中，而在- 80℃的超低溫槽中放置一個(gè)晚上。

6.放進(jìn)液態(tài)氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管，迅速地放進(jìn)容器內(nèi)。